Desenvolvimento e caracterização de marcadores de DNA microssatélites para Aniba rosaeodora Ducke (Lauraceae): uma espécie florestal Amazônica ameaçada / Rafael Costa Angrizani.

Dissertação (mestre) - INPA/UFAM, 2008

o Pau-rosa, Aniba rosaeodora Ducke (Lauraceae), é um dos principais produtos florestais não-madeireiros da Amazônia brasileira, utilizado principalmente como fonte deóleo essencial na indústria de perfumaria. Devido ao seu valor econômico as populações naturais de Pau-rosa têm sido fortemente exploradas e o status de conservação da espécie é preocupante. Assim, estratégias efetivas para a conservação e manejo desse recurso devem ser implementadas, levando em consideração, entre outros fatores, dados ecológicos e genéticos. Marcadores de DNA microssatélites são amplamente reconhecidos por seu alto conteúdo informativo e têm sido freqüentemente utilizados em estudos de genética de populações, conservação genética e manejo de espécies. Neste estudo são reportados o isolamento e a caracterização de nove locos microssatélites para Aniba rosaeodora, visando disponibilizar uma bateria de marcadores informativos para aplicações em estudos sobre a diversidade e estrutura genética de populações, fluxo gênico e sistema de reprodução desta valiosa espécie. Para tal foi construída uma biblioteca genômica enriquecida para o dinucleotídeo AG. O DNA genômico total, extraído a partir de um indivíduo de A. rosaeodora, foi clivado utilizando-se a enzima Sau3AI. Fragmentos ricos em repetições foram selecionados por meio de hibridização e posteriormente clonados em plasmídeo p-GEMT e transformados em Escherichia coZi. No total, 196 clones positivos foram selecionados e seqüenciados em um seqüenciador de DNA ABI 377. Dos 196 clones seqüenciados, 72 (37%) continham seqüências repetidas (microssatélites). Foram desenhados quarenta pares de primers, dos quais, quatorze pares foram testados para análises de polimorfismos. Dentre os 14 locos analisados, dez foram polimórficos, dois monomórficos e dois não amplificaram. Dentre os dez locos polimórficos detectados, nove foram caracterizados com base em detecção fluorescente em sistema multiplex, utilizando-se 68 indivíduos de duas populações de A. rosaeodora. No total foram detectados 119 alelos para os nove locos analisados (média de 13,2 alelos por loco). A heterozigosidade média observada foi 0,63 e a heterozigosidade média esperada foi igual a 0,79. As probabilidades de exclusão de paternidade e de identidade genética estimadas para os locos em conjunto foram 0,99998 e 2,4 x 10-13, respectivamente. Os altos níveis de polimorfismo e o poder de discriminação individual observados para esses locos permitirão realizar estimativas precisas de fluxo gênico, análise de parentesco e sistema de cruzamento em populações de A. rosaeodora, contribuindo assim para o conhecimento da genética de populações bem como para a conservação e manejo desse valioso recurso florestal amazônico.

Ärea de concentração: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva.