Purificação e propriedades de uma enzima do veneno de "Lachesis muta muta" com atividade de trombina / Gilson José de Oliveira.

Dissertação (mestre) - Universidade Federal de Minas Gerais, 1974

Purificou-se uma enzima do veneno de L. muta, que se assemelha à trombina. Sua purificação foi possível por passagens sucessivas em colunas de Sephadex G-100, hidroxilapatita, DEAE-celulose e filtração molecular em Sephadex G-150. A enzima apresentou-se homogênea por eletroforese em gel de poliacrilamida e filtração em gel de Sephadex G-150. Trata-se de uma glicoproteína com peso molecular 36.00 daltons, determinado por filtração em gel. O pI aproximado, determinado pela migração eletroforética, foi de 5,1. A enzima apresenta atividade amidásica e esterásica, utilizando-se como substrato o DL-BApNA e o TAME, respectivamente, com uma atividade esterástica máxima em pH 8,6. Os parâmetros cinéticos medidos com o L-TAME foram: Vm 3,53 x 10² µmo 1/ (min.mg), Km 1,45 x 10 -4M, Kcat 2,12 x 10² s-¹ e relação kcat/Km 1,46 x 10 elevado a 6 M-¹ .s-¹ . Os parâmetros cinéticos aparentes medidos com o DL-BApNA, foram : Vm = 1,5 molar. s-¹, Km = 2,72 x 10 - 4 M, Kcat 0,903 s-¹ e a relação Kcat/Km 3,32 x 10³ M-¹ . s-¹. Os valores de Ki determinados para alguns inibidores competitivos, usando o BApNA como substrato, foram : ß-naftamidina-HC1 (6,64 ± 1,28) x 10 - 6 M, benzamidina-HC 1 (6,87 ± 1,83) x 10 - 5 M e (fenilguanidina) 2 S0 4 (2,09 ± 0,63) x 10 - 4 M. A enzima é inibida por DFP e fracamente inibida pelo TLCK, coagula o fibrinogênio "in vitro", apresentando uma atividade de 1.650 U/mg.