Distribuição subcelular e regional de atividade cininásica em cérebro de coelho / Luiz Frederico Mendes dos Reis Arruda.

Dissertação (mestre) - Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto/Universidade de São Paulo, 1975

A distribuição subcelular e regional de atividade cininásica em cérebro de coelho foi estudada por 1) ensaios biológicos em élio isolado de cobaia, para determinar a atividade cininásica total e 2) através de análises por cromatografia de troca iônica (analisador de aminoácidos), para determinar os fragmentos peptídicos liberados da bradicinina pelas cininases e por outras peptidases. A distribuição subcelular de atividade cininásica foi determinada em frações preparadas a partir de homogeneizados de córtex cerebral, obtidas por centrifugação diferencial: nuclear (sedimentada a 1.000 x g x 10 min); mitocondrial "crua" (sedimentada a 14.500 x g x 20 min); microsômica :(sedimentada a 100.000 x g x 60 min). A fração mitocondrial "crua" foi, em seguida, subfracionada por centrifugação em gradiente descontínuo de Ficoll-sacarose, em três preparações: mielínica, sinaptosômica e "mitocondrial". A identificação destas três últimas frações foi confirmada por microscopia eletrônica. A distribuição regional de atividade cininásica foi determinada em homogeneizados totais e sobrenadantes e precipitados pH 5 de sobrenadantes 25.000 x g x 60 min, das preparações regionais: córtex cerebral, mesodiencéfalo, hipotálamo,ponte-bulbo, cerebelo e substância branca. Os ensaios biológicos com íleo isolado de cobaia mostraram atividade cininásica total concentrada principalmente nas frações "solúveis", ainda que uma quantidade razoável desta atividade enzimática tenha sido também detectada nas frações particuladas, especialmente na fração sinaptosômica. O tratamento prévio com desoxicolato de sódio pouco alterou os resultados obtidos nas frações mielinica, sinaptosômica, "mitocondrial" e microsômica. Entretanto, a aplicação de choque osmótico provocou um sensível aumento de atividade cininásica, sobretudo na fração sinaptosômica, o que sugere que parte da atividade cininásica detectada nessas estruturas vesiculares deve estar ligada a porção solúvel das mesmas. Regionalmente, a atividade cininásica total mostrou-se um pouco mais elevada no córtex cerebral; contudo, não se verificaram diferenças acentuadas entre as várias preparações regionais. A análise dos produtos resultantes da ação de preparações enzimáticas subcelulares e regionais, não mostrou uma localização preferencial de cininases do tipo A (hidrolisa a bradicinina especificamente na ligação Phe5-Ser6) ou tipo B (hi-drolisa a bradicinina especificamente na ligação Pro7 - Phe8 ), indicando, portanto, uma distribuição difusa destas duas enzimas no tecido nervoso.