Análise do transcritoma de etiquetas de sequências expressas da hipófise e parte do cérebro do tambaqui (Colossoma macropomum) e expressao do cDNA do hormônio de crescimento em Pichia pastoris / Alexandra Regina Bentes de Sousa.

Tese (doutor) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia - INPA, 2009

O tambaqui, Colossoma macropomum, é um peixe de grande valor comercial para região amazônica e representa uma espécie modelo para a região em vista dos inúmeros estudos a seu respeito, quer seja pela biologia, fisiologia e genética. Devido a sua grande importância, o objetivo desse trabalho foi construir e caracterizar uma biblioteca de cDNA mista de hipófise e partes do cérebro, identificar transcritos através de anotação genômica utilizando ferramentas de bioinformática, para categorização dos transcritos e posteriormente identificação de genes de interesse biotecnológico, seguido da expressão e secreção de um deles na forma recombinante. A biblioteca gerada foi sequenciada e como resultado foi obtido 1728 clones que resultaram em 1060 ESTs agrupados em 184 contig s e 12 singlets. A maioria dos genes conhecidos, encontrados na presente análise, está relacionada com os genes ribossomais, seguido dos genes mitocondriais. Além desses, outros transcritos importantes foram identificados e o índice de novidade foi de 43%. Nessas análises, foi possível identificar e isolar o gene do hormônio de crescimento (GH) e logo iniciar o estudo de expressão e secreção do hormônio de crescimento recombinante do tambaqui (tGH) no sistema Pichia pastoris. A partir da sequência de cDNA do tambaqui, a região estrutural do gene do hormônio de crescimento foi construída por síntese química e introduzida no "cassete de expressão/ secreção" do vetor pPIC9. O plasmídeo recombinante denominado tGH foi introduzido em células de P. pastoris por eletroporação, os clones recombinantes foram selecionados pelo marcador genético auxotrófico HIS4. A maior expressão do tGH pela P. pastoris GS115 foi alcançada após 72 h de cultivo. A massa molecular estimada em gel de SDS-PAGE 15% revelou que o tamanho do tGH era de 22 kDa, similar ao tamanho do hor mônio de crescimento de outras espécies de vertebrados descritos na literatura. Dessa forma, o tGH dessa importante espécie para aquicultura local poderá ser posteriormente aplicado em ensaios experimentais, visando o futuro uso como fator de aceleração do crescimento de peixes de interesse comercial. Tais resultados abrem perspectivas para um estudo mais amplo tanto na área genômica quanto na aplicação do hormônio de crescimento recombinante na piscicultura.

Área de concentração: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva.