Extraçao e purificaçao de inibidores proteolíticos em sementes de leguminosas arbóreas da Amazônia / Larissa Ramos Crevreuil.

Dissertação (mestre) - INPA, 2009

A família Fabaceae é importante na indústria madeireira, como fonte de proteínas vegetais e contém uma grande variedade de biomoléculas com potencial para aplicaçao industrial, incluindo os inibidores proteolíticos, os quais sao proteínas que podem atuar como fonte de aminoácidos sulfurados, na regulaçao de proteinases endógenas e na defesa das plantas contra o ataque de insetos e patógenos. Os objetivos deste trabalho foram a investigaçao e caracterizaçao parcial dos inibidores proteolíticos bem como suas propriedades bioquímicas em extratos e fraçoes de sementes de leguminosas arbóreas da flora amazônica: Parkia pendula, Parkia discolor, Parkia multijuga, Parkia nitida e Enterolobium schomburgkii. Os extratos obtidos após extraçao salina, precipitaçao por acetona e precipitaçao por sulfato de amônio foram utilizados para a quantificaçao protéica e nas etapas de detecçao da atividade inibitória contra tripsina e quimotripsina bovina. O extrato total (ET), proveniente da extraçao salina, foi submetido à cromatografia de afinidade em Sepharose tripsina. As espécies P. pendula, P. discolor e P. nitida, mostraram maiores teores de proteínas nos ET, enquanto as espécies E. schomburgkii e P. multijuga mostraram estes resultados nos sobrenadantes submetidos ao fracionamento por sulfato de amônio a 0-30% e 60-80% de saturaçao. A atividade inibitória sobre tripsina foi maior nos extratos totais para todas as espécies, com possível perda de atividade após precipitaçao acetônica e precipitaçao por sulfato de amônio a 30-60% de saturaçao para E. schomburgkii. Contudo, a inibiçao da quimotripsina acima de 50%, foi observada apenas no extrato total e no precipitado cetônico de P. nitida. Os valores das constantes de inibiçao (Ki) foram de 8,92 x 10-8 M; 6,89 x 10-8 M; 6,15 x 10-8 M, para P. pendula, P. discolor e P. multijuga, respectivamente. Os inibidores de tripsina apresentaram massas moleculares aparentes de 17 kDa (PpTI), 21 kDa (PdTI), 19 kDa (PmTI e PnTI) e 18 kDa (EsTI), bem como afinidade diferenciada contra a tripsina e quimotripsina bovina. Os resultados mostram que, provavelmente, os inibidores pertencem à família Kunitz.

Área de concentração: Ciências de Florestas Tropicais