Expressão gênica diferencial em tambaquis, Colosoma macropomum (Cuvier, 1818), expostos ao petróleo e a hipoxia / Luciano Ricardo Braga Pinheiro.

Dissertação (mestre) - INPA/UFAM, 2007

A exploração de petróleo na Bacia Amazônica já é uma realidade. As condiçSes de pH, sedimentos precipitados, vegetação, oxigenação e vazão neste ambiente são tão peculiares que é difícil avaliar com precisão quais os reais impactos de um vazamento de óleo em águas interiores na Amazônia. Neste trabalho o Tambaqui, peixe endêmico da Bacia Amazônica, foi avaliado como alternativa de biomarcador de contaminação por petróleo. Por meio da técnica de DD RT-PCR investigamos o padrão de expressão gênica em juvenis de Tambaquis expostos a concentraçSes subletais e o dobro da concentração letal de óleo cru nos intervalos de tempo de 3, 6 e 12 horas, sendo este último tempo o período proposto para recuperação, sob condiçSes de normóxia e hipóxia. Após os experimentos os animais foram sacrificados e o fígado imediatamente congelado em nitrogênio líquido para posterior extração do RNA. A síntese da fita complementar de cDNA foi feita por 3 iniciadores poli-T ancorados com nucleotídeos terminais C,G ou A. A reação de amplificação se deu combinando os iniciadores poliT com outros 5 iniciadores heterólogos de 13 nucleotídeos. O produto amplificado foi revelado em gel de agarose 2,5% e corado com brometo de etídium, sendo as bandas diferencialmente expressas eluídas e clonadas com E.coli com Vetor P-gen easy sistem para posterior seqüenciamento e comparação com bancos públicos de ESTns. Foram identificados 4 genes: (i) RAG2 (recombination-activating genes); (2) ERK (mitogen-activated protein kinase); (iii) GR (glutathione reductase); e (iv) CFTR. Os três últimos estão amplamente reportados como agentes do processo de desintoxicação, enquanto que o primeiro é um regulador na formação de células do sistema imune. RAG2 e ERK também estão envolvidos em mecanismos de apoptose celular (morte programada da célula), GR no processo antioxidante em condiçSes de estresse ambiental e CFTR como regulador de Cálcio em brânquias de peixes. O método de DD RT-PCR mostrou-se eficiente no processo de identificar vias bioquímicas que habilitem organismos da Bacia Amazônica como biomarcadores de poluição ambiental causada por petróleo.

ãrea de concentração : Genética, Conservação e Biologia Evolutiva