Isolamento, caracterização e mapeamento cromossômico de elementos repetitivos em espécies da família Anostomidae (Ostariophysi – Characiformes): análise comparativa em diferentes tipos de águas amazônicas / Lucas Caetano de Barros

Tese (doutor) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia - INPA, 2017

Anostomidae abriga cerca de 145 espécies, distribuidas em 13 gêneros, conhecidas, na região Norte, como aracus e nas demais regiões do Brasil, como piaus. No presente trabalho foram analisados 90 espécimes desta família, representando as espécies Megaleporinus trifasciatus (antigo Leporinus trifasciatus), Leporinus fasciatus, L. friderici, L. agassizi, Laemolyta taeniata, Anostomoides laticeps, Rhytiodus microlepis e Shizodon fasciatus, coletadas em cinco locais na Amazônia, com o objetivo de identificar como as modificações cromossômicas/genômicas podem estar relacionadas com diferentes condições ambientais, como os diferentes tipos de água que são encontrados nesta região. Para isso foram utilizadas técnicas da citogenética clássica (Giemsa, Ag-RON, Bandeamento C), citogenética molecular (Hibridização in situ fluorescente - FISH, cross-FISH e microdissecção do cromossomo W de M. trifasciatus). No geral, os resultados não revelaram padrões associados aos diferentes biótopos, tanto na análise intra-específica quanto interespecífica. Com relação à estrutura cariotípica, todas as espécies são conservativas em relação a vários marcadores cromossômicos convencionais, porém, diferenças significativas foram encontradas na distribuição da heterocromatina e do par portador da região organizadora de nucléolo. O DNAr 18S apresentou sítios múltiplos, evidenciados em vários pares cromossômicos em algumas espécies, enquanto o DNAr 5S foi localizado em um único par cromossômico em todas as espécies. A hibridização cruzada (crossFISH) com sondas de M. trifasciatus (WMt), M. elongatus (WMe) e M. macrocephalus (WMm)(espécies já analisadas) revelou que os genomas de M. trifasciatus, M. macrocephalus (espécies com sistema ZZ/ZW) e M. elongatus (espécie com sistema Z1Z1Z2Z2/Z1W1Z2W2) apresentam alto grau de similaridade, tanto na estrutura quanto na localização dos sítios de hibridização. Entretanto, a hibridização cruzada desta sonda, no genoma de espécies do gênero Leporinus, que não apresentam sistema de cromossomo sexual diferenciado, mostrou baixa similaridade. Esta informação é de grande importância, uma vez que o acúmulo de sequências repetitivas nas regiões ricas em genes pode refletir a diferenciação entre proto-sexuais, em diferenciação para o par heteromórfico ZW. Os resultados obtidos neste estudo mostram que as sequências repetitivas realmente possuem papel atuante na carioevolução dos anostomídeos, principalmente na evolução do sistema de cromossomos sexuais em M. trifasciatus, M. elongatus e M. macrocephalus e na origem dos múltiplos sítios de DNA ribossomal 18S em Rhytiodus microlepis, Laemolyta taeniata, Schizodon fasciatus e Megaleporinus trifasciatus.